Odpovědět:
Je to použití protilátek k detekci proteinů, které byly odděleny pomocí SDS-PAGE a poté přeneseny na membránu.
Vysvětlení:
Buňky obsahují směs proteinů (mnoho tisíc) a tyto mohou být separovány pomocí SDS-PAGE.
Proteiny z SDS-PAGE jsou pak přeneseny pomocí elektrického pole z gelu na membránu, typicky z nitrocelulózy nebo polyvinylidenfluoridu (PVDF).
Membrána je sondována primární protilátkou specifickou pro daný protein. Sekundární protilátka se pak použije k detekci primární protilátky. Sekundární protilátka bude obsahovat marker, který může být detekován chemickou reakcí, aby buď poskytl viditelný pás na membráně, nebo signál, který může být zachycen specializovanou kamerou.
Pokud je to nutné, můžu tuto odpověď rozšířit do velké hloubky, protože jsem během své kariéry provedl několik stovek západních blotů.
Co je to Western blot imunotest?
Western blot (protein immunoblot) je široce používaná analytická technika používaná k detekci specifických proteinů ve vzorku tkáňového homogenátu nebo extraktu. Klíčové prvky potřebné pro splnění tohoto úkolu jsou: separace proteinových směsí podle velikosti pomocí gelové elektroforézy. účinný přenos separovaných proteinů na pevný nosič. specifická detekce cílového proteinu přibližně odpovídajícími protilátkami. Schopnost Western blotů jasně ukázat přítomnost speci
Co může být problém, pokud se kapely neobjeví v programu Western Blot?
Mnoho ... Existuje mnoho důvodů, proč se kapely nemusí objevit na western blotu. Pracovala v minulosti kombinace vzorků a protilátek? Níže jsou jen některé, na které si v tuto chvíli myslím, že mohou způsobit, že se kapely neobjeví: Přenos proteinu z gelu? Zkuste barvit membránu něčím podobným ponceau S nebo amido black, abyste zjistili, zda jsou kapely přítomny. Někdy můžete vidět proteinové pásy na membráně tak, že je navlhčíte a přidržíte je pod úhlem ke světlu. Pracuje primární protilátka? To je těžké testovat
Proč je to tzv. Western blotting?
Je to vtip. Tam byla technika vynalezená volal “Southern blotting” - tato metoda byla nejprve vydávána britským biologem Edwin Southern. Ve způsobu se fragmenty DNA separují elektroforézou, přenesou na membránu a tato přítomnost se detekuje hybridizací sondy. V Western blotování jsou proteiny separovány elektroforézou a poté přeneseny na membránu a jejich přítomnost je detekována protilátkami. Když byl vynalezen Western blotting, bylo rozhodnuto jít s tématem "kompasu" a jít na západ. Měli byste si všimno