Odpovědět:
Western blot (protein immunoblot) je široce používaná analytická technika používaná k detekci specifických proteinů ve vzorku tkáňového homogenátu nebo extraktu.
Vysvětlení:
Klíčové prvky potřebné pro splnění tohoto úkolu jsou:
- separace proteinových směsí podle velikosti pomocí gelové elektroforézy.
- účinný přenos separovaných proteinů na pevný nosič.
- specifická detekce cílového proteinu přibližně odpovídajícími protilátkami.
Schopnost Western blotů jasně ukázat přítomnost specifického proteinu, jak velikostí, tak vazbou protilátky, je činí vhodnými pro hodnocení hladin proteinové exprese v buňkách pro monitorování frakcí během purifikace proteinu.
V mnoha případech se Western bloty používají v kombinaci s jinými detekčními technikami založenými na klíčových protilátkách, jako je ELISA nebo imunohistochemie.
Co může být problém, pokud se kapely neobjeví v programu Western Blot?
Mnoho ... Existuje mnoho důvodů, proč se kapely nemusí objevit na western blotu. Pracovala v minulosti kombinace vzorků a protilátek? Níže jsou jen některé, na které si v tuto chvíli myslím, že mohou způsobit, že se kapely neobjeví: Přenos proteinu z gelu? Zkuste barvit membránu něčím podobným ponceau S nebo amido black, abyste zjistili, zda jsou kapely přítomny. Někdy můžete vidět proteinové pásy na membráně tak, že je navlhčíte a přidržíte je pod úhlem ke světlu. Pracuje primární protilátka? To je těžké testovat
Proč se GAPDH používá v Western Blot? + Příklad
GAPDH se často používá jako kontrola načítání. Při Western blotování často používáme GAPDH jako kontrolu načítání. To znamená, že sondováním na GAPDH můžeme zkontrolovat, že máme naložená ekvivalentní množství proteinů v různých drahách blotu. Příklad použití - říkáme, že máme nemoc, o které si myslíme, že způsobuje zvýšení určitého proteinu v buňce. Vytvořili bychom vzorek ze "zdravých" buněk a dalšího vzorku z "nemocných" buněk. Pak b
Proč se Western blot používá pro testování HIV?
Děláte to, abyste si byli jisti, že HIV je to, co jste hledali. Western vám umožňuje detekovat protilátky proti HIV.