Odpovědět:
GAPDH se často používá jako kontrola načítání.
Vysvětlení:
Při Western blotování často používáme GAPDH jako kontrolu načítání. To znamená, že sondováním na GAPDH můžeme zkontrolovat, že máme naložená ekvivalentní množství proteinů v různých drahách blotu.
Příklad použití - říkáme, že máme nemoc, o které si myslíme, že způsobuje zvýšení určitého proteinu v buňce. Vytvořili bychom vzorek ze "zdravých" buněk a dalšího vzorku z "nemocných" buněk. Pak bychom naložili ekvivalentní množství proteinů obou vzorků na gel pro Western blot.
Po sondování blotu pro náš protein, který je předmětem zájmu, zjistíme, že v nemocných buňkách je hladina proteinu skutečně zvýšená (to znamená, že na blotu je produkován tmavší pruh). Abychom dokázali, že tento nárůst proteinu je způsoben změnou exprese v buňce, namísto zatěžovacího artefaktu (to znamená, že instenční pásmo je způsobeno změnou exprese proteinu v buňkách, a nikoliv náhodným načtením více "Nemocného" vzorku než "zdravého") bychom také sondovali blot pro GAPDH, abychom ukázali, že celkové hladiny proteinů jsou v obou drahách stejné.
Tím, že děláme toto my ukazujeme, že ekvivalentní bílkovina byla naložena ve dvou dráhách a že změna v intenzitě pásma my pozorujeme je kvůli změnám v expresi proteinu pro protein zájmu.