Odpovědět:
Je to způsob separace různých proteinů na základě jejich nábojových a vazebných vlastností k materiálu.
Vysvětlení:
Při různých hodnotách pH mají různé proteiny různé náboje. Umístěním směsi proteinů v nastaveném pH můžete mít směs, která obsahuje proteiny s různými nabíjecími vlastnostmi.
Pokud se tato směs proteinů nalije na kolonu, která obsahuje materiál s nábojem na ní, sloupec bude vázat proteiny v opačném náboji.
Potom můžete použít různé roztoky obsahující různá množství iontů k eluci (odlepení) proteinů z kolony.
Řekněme například, že jste měli směs proteinů, z nichž chcete čistit konkrétní protein. Pokud jste věděli, že při určité hodnotě pH byl váš protein kladně nabit, můžete nalít směs na kolonu, která obsahovala záporně nabitý materiál.
Všechny proteiny, které nenesly náboj, nebo když záporně nabité, by proudily přímo kolonou. Pak byste mohli uvolnit svůj kladně nabitý protein zaplavením kolony kladnými ionty, které by doplnily negativní náboj na koloně. Tato konkurence pak způsobí, že váš protein, který vás zajímá, bude eluován.
Zde je příklad tohoto děje.
Každý podnos obsahuje pufr s jinou koncentrací a jak je vidět na 175mM vzorku (levý horní roh), velmi málo červenohnědého proteinu se navázalo na nabitou membránu, protože mezi ionty v pufru a pufrem se nacházela konkurence. protein pro nabitá vazebná místa na membráně (Ionty v pufru "vyhrály", protože jich je více a tak zabraňují vazbě proteinu). Ve vzorku v pravém dolním rohu se na membránu navázalo mnoho proteinu, protože je méně přítomných iontů, které by mohly soutěžit o vazebná místa.
V tomto videu můžete vidět aniontoměničovou chromatografii v provozu: