Odpovědět:
Protože je efektivnější.
Vysvětlení:
Enzymy, jako jsou restrikční enzymy, musí rozpoznat velmi specifickou sekvenci, aby mohly splnit svůj úkol. Navazuje se na DNA pouze v jedné specifické konfiguraci. Naštěstí! protože nechcete 'pacman', který stříhá DNA na náhodných místech.
DNA je dvouvláknová, takže má dvě strany, na které se může enzym vázat. Palindromická sekvence je na obou stranách stejná dozadu a dopředu (viz obrázek níže). To znamená, že enzym rozpoznává sekvenci bez ohledu na to, ze které strany se enzym blíží DNA.
Palindromická sekvence také zvyšuje šanci, že se oba řetězce DNA štěpí. Je dokonce možné, že dva enzymy fungují jako dimer pro řez palindromické sekvence, což dále zvyšuje účinnost.
Poslední důvod byl důležitý v boji mezi viry a bakteriemi. Bakterie se vyvinuly tak, aby „deaktivovaly“ viry zacílené na bakterie (bakteriofágy) pomocí restrikčních enzymů, které se váží na tyto palindromické sekvence. Řezání obou řetězců DNA poškozuje virus více než řezáním jednoho řetězce.
PBR322 je plazmid mající dvě restrikční místa pro EcoRI, zatímco T4 fágová DNA má pro něj tři restrikční místa. Tyto dvě DNA byly ošetřeny EcoRI a ponechány běžet na agarózovém gelu. Jaký vzor se získá na gelu?
Neplatná otázka, T4 má kolem 40 míst pro EcoR1, ne 3 ... pBR322 má pouze 1 místo pro EcoR1, mezi genem faktoru rezistence AMP a genem TET ... T4 digest: (děkuji, Springer Verlag!) obrázek pořízený z http://link.springer.com/article/10.1007/BF00272920 © Springer-Verlag 1981 Pokud je však vaše otázka hypotetičtější: oba pBR322 a T4-genomy jsou kruhové, takže: pBR322: 2cuts = 2 fragmenty, T4: 3cuts = 3 fragmenty. Na agarózovém gelu byste viděli 2 pruhy v pBR-pruhu, 3 pruhy v T4-pruhu, UNLESS 2 nebo více fragmentů mají stejnou nebo stejnou vel
Proč je většina reakcí restrikčních enzymů prováděna při teplotě 37 ° C?
Většina enzymových funkcí je u lidí prováděna při 37 ° C, protože enzymy jsou schopny udržet svou strukturu při této teplotě, což jí umožňuje účinně štěpit komplexní molekuly. Když se teplota zvýší, chemické vazby, které tvoří enzym, nejsou tak silné, protože aktivita vzrůstá z normálního stavu. Enzym končí ztrátou svého molekulárního tvaru, struktury a vlastností. Tento proces je znám jako denaturace, což má za následek snížení jeho schopnosti štěpit komplexní molekuly.
Proč je pro restrikční enzymy důležitější rozpoznat palindromické sekrece?
Navzdory tomu, že jde o endonukleázu, tj. Enzym štěpící nukleovou kyselinu, restrikční endonukleáza náhodně nezničí molekulu DNA. Enzymy se štěpí pouze v palindromických sekvencích za vzniku menších fragmentů DNA. Restrikční enzymy se používají k řezání kruhové molekuly DNA prokaryotického původu. Tento typ endonukleázy často produkuje lepkavé konce, které pomáhají při tvorbě rekombinantní DNA, to znamená, že do řezu může být vložen cizí fragment DNA (obsahující požadovaný ge