Odpovědět:
Čištění frakce bílkovin …
Vysvětlení:
Pokud čistíte (často specifický) protein, budete se muset zbavit tolika odpadků, kolik jich můžete vázat.
Záleží na míře, po které jste protein, ale obecně je to dobrý nápad, zejména v preparativní čištění, aby se zbavili co nejvíce nečistot.
1:
Protože proteiny jsou obecně velké a následně se objeví v nižších pásech (ultracentrifugované) frakce, chcete se zbavit jakýchkoli nukleových kyselin, zejména pokud se protein, který puryfying týká, líbí podobným proteinům. Pol1, Reverzní transkriptáza nebo jakýkoli jiný enzym zapojený do replikace / transkripce / translace.
Nukleové kyseliny přítomné ve vzorku můžete oddělit pomocí DNAsy: tato DNA zcela hydrolyzuje DNA do jejích základních částí.
Mějte na paměti, že existují různé DNAsy, všechny se liší svým mechanismem a specificitou pro svůj substrát. V závislosti na použité DNAse to může ukázat Endo- nebo Exo aktivita nukleázy …
Více k věci, RNAza Je vhodnější, protože RNA je obvykle více v rozsahu vzrůstu bílkovin a může být vázána na protein.
2:
Lysozym: Enzym, který má alespoň dvě funkce:
Deglykosyluje enzymy: Většina proteinů nesených v krevním řečišti je glykosylovaná: mají k nim připojeno několik molekul cukru. Lysozym odstraní zbytky cukru.
Má také schopnost rozbít buněčnou stěnu bakterií grampozitivních, což je způsobuje lyse. (pokud chcete čistit protein z grampozitivních bakterií)
Jakékoliv degradované produkty, buď nukleová kyselina nebo zbytky cukru, se objeví na horních frakcích zkumavky Centrifuge kvůli jejich "lehčí" vztlaku.
Jaké jsou některé příklady metod čištění proteinů?
Srážení Dialyzační membránová filtrace Pokud znáte izoelektrický bod proteinu, můžete precipitovat a filtrovat nebo odstředit proteinovou frakci úpravou pH. Proteiny jsou poměrně velké molekuly a dialyzační nebo membránová filtrace může být použita k odstranění nečistot, které budou snadno procházet póry membrány, zatímco si zachovají proteinovou frakci.
Martina používá pro každý náhrdelník, který vyrábí, n korálky. Ona používá 2/3, že počet korálků pro každý náramek ona dělá. Který výraz ukazuje počet korálků, které Martina používá, když vyrobí 6 náhrdelníků a 12 náramků?
Ona potřebuje 14n korálky, kde n je počet korálků použitých pro každý náhrdelník. Nechť n je počet kuliček potřebných pro každý náhrdelník. Pak korálky potřebné pro náramek jsou 2/3 n Takže celkový počet korálků by byl 6 xx n + 12 xx 2 / 3n = 6n + 8n = 14n
Proč jsou detergenty potřebné k extrakci integrálních membránových proteinů, ale nikoli periferních membránových proteinů?
Extrinické nebo periferní proteiny se volně drží v membráně, jejich odstranění je snadné. Mohou být odstraněny jednoduše změnou pH. Vnitřní proteiny jsou hluboko zapuštěny do membrány, a proto jsou pro jejich izolaci nezbytné detergenty.